產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用速率法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿中的 D - 乳酸脫氫酶（D-LDH）活性。檢測范圍覆蓋 0.313-20 U/L，靈敏度達(dá) 0.16 U/L，適用于腸道黏膜損傷、細(xì)菌感染、代謝紊亂及肝功能檢測研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)elisa試劑盒
英文名稱：D-LDH ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào)：CS-6199E
檢測原理：
大鼠 D - 乳酸脫氫酶 (D-LDH) ELISA 試劑盒的原理是速率法，通過 D-LDH 催化乳酸的氧化反應(yīng)，生成的產(chǎn)物與顯色劑作用，利用吸光度變化速率定量檢測酶活性。
固相化：微孔板預(yù)先包被 D-LDH 特異性反應(yīng)底物。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，D-LDH 催化底物發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成顯色產(chǎn)物。
檢測：加入顯色劑，與產(chǎn)物發(fā)生特異性顯色反應(yīng)。
顯色：顯色劑隨產(chǎn)物生成量逐漸變色，顏色深淺與 D-LDH 活性相關(guān)。
測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長連續(xù)測定吸光度變化速率，活性與速率值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1.平衡試劑：試劑盒室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按比例稀釋備用。
2.加樣：設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔，每孔加對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 稀釋后樣本，封板溫育。
3.溫育反應(yīng)：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗體結(jié)合。
4.洗板：棄液甩干，洗滌液注滿每孔，浸泡后拍干，重復(fù)洗板3–5 次。
5.加酶結(jié)合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體，封板 37℃再次溫育。
6.再次洗板：同上述洗板流程，洗凈未結(jié)合游離酶標(biāo)物。
7.顯色：每孔先后加入 A、B 顯色液，避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù)：加終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)變黃；立即用酶標(biāo)儀在對應(yīng)波長測定 OD 值。
9.結(jié)果計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度、OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算樣本待測指標(biāo)濃度。
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