產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿中的 LBP 蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于內(nèi)毒素血癥、炎癥反應(yīng)、膿毒癥及免疫防御研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)elisa試劑盒
英文名稱：LBP ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-5224E
檢測原理：
大鼠脂多糖結(jié)合蛋白 (LBP) elisa 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標記的檢測抗體進行識別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 LBP 抗體。
?結(jié)合?：加入標準品或樣本，LBP 被固相抗體捕獲。
?檢測?：加入生物su化的抗大鼠 LBP 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?：
1. 試劑準備
將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標準品用標準品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標準溶液，備用。
2. 實驗流程
加樣：設(shè)置空白孔、標準孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應(yīng)標準品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。
洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。
顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。
終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標準曲線計算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點
全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。
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操作步驟?：
?1、試劑與樣本準備?：
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），按說明書稀釋洗滌緩沖液（通常1:19）。
?標準品?：用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。
?樣本?：血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高，可按說明書（如1:10）稀釋。
?2、加樣與孵育?：
每孔加入100μL標準品或樣本。
輕輕振蕩混勻，避免觸碰孔壁。
37℃孵育90分鐘（部分試劑盒可能為120分鐘，需以說明書為準）。
?3、洗滌?：
棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液加滿每孔，靜置30秒后甩干，重復(fù)5-6次。
4?、加檢測抗體與孵育?：
每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測抗體。
37℃孵育60分鐘。
5?、再次洗滌?：
同步驟3，洗去未結(jié)合抗體。
6?、顯色?：
每孔加入90-100μL TMB底物混合液（A液+B液）。
37℃避光孵育10-15分鐘。
?7、終止與測定?：
每孔加入50μL終止液，立即混勻（顏色由藍變黃）。
在加終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標儀在450nm波長處測定各孔吸光度（OD值）。
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